تبليغاتX
گروه آموزشی زیست شناسی استان کرمان - استخراج دی ان آ

دوشنبه سیزدهم اسفند 1386

استخراج دی ان آ

روشهاي مختلفي براي استخراج DNA  از ميوه ها و پياز ارائه شده اند كه دلايل زير براي اعمالي كه در اين روشهاي مختلف انجام مي شود ذكر مي گردد:

1-چليت كردن كاتيون هاي دو ظرفيتي مانند Ca2+, Mg2+  به وسيله نمك براي متوقف كردن اعمال آنزيم تجزيه كنندهDNA (دي ان آزDNase-) همچنين نمك مي تواند انتهاهاي  فسفات DNA  را به هم نزديك كند

و در نتيجه رسوب آن را آسانتر نمايد.

2-خرد كردن سلولها به وسيله رنده كردن

3- ازبين بردن ليپيدهاي غشاء به وسيله اضافه كردن دترجنت و در نتيجه شكسته شدن غشاء

4-از بين بردن پروتئين هاي سلول و هيستون ها ي متصل به DNA  به وسيله اضافه كردن يك پروتئاز و يا ته نشين كردن آنها  با استات سديم يا آمونيوم  و يا نمك آشپزخانه

5-رسوب DNA در اتانول يا ايزوپروپانول سرد زيرا DNA در الكل نامحلول است اما در آب محلول است به هم مي چسبند و اين مرحله همچنين نمك را خارج مي كند.

6-حرارت دادن(50 تا 60 درجه سانتي گراد) نه تنها به شكستن سلولها كمك مي كند بلكه باعث غير فعال شدن آنزيم هاي DNaseنيز مي شود البته حرارت دادن اگر زياد طول بكشد خود DNA را نيزتجزيه مي كند. به همين علت در روشهائي كه از حرارت استفاده مي شود بايستي حد اكثر 12 دقيقه عصاره را در حمام آب گرم قرار داد و سپس بلافاصله جهت جلوگيري از انهدام DNA عصاره را در حمام آب سرد-يخ به مدت15 -5 دقيقه قرار داد.

7-كج نگاه داشتن لوله و سپس اضافه كردن الكل سرد مانع از مخلوط شدن عصاره و الكل ميگرددو در نتيجه دو فاز تشكيل مي گردد.

http://www.biologycorner.com/worksheets/DNA_extraction.html

http://www.funsci.com/fun3_en/dna/dna.htm

نوشته شده توسط مهدی باغینی پور در 11 بعد از ظهر |  لینک ثابت   •