تبليغاتX
گروه آموزشی زیست شناسی استان کرمان - بلور DNA

سه شنبه چهاردهم اسفند 1386

بلور DNA

لطفا طرز تهیه بلور DNA راشرح دهيد

 

مقاله اي با عنوان زير در مورد تهيه بلور DNA جلب توجه نمود:

به منظور بررسي شيار اصلي در Z-DNA.بلور هاي كوچك از يك اوليگونوكلئوتيد سنتتيك تهيه و به وسيله انتشار بخار(Vapor Diffusion )  با استفاده از دو روش قطره آويزان(hanging drop method  )   و قطره نشسته(sitting drop method )  بلور ها رشد داده شدند و با قرار دادن بلور ها در لوله هاي سيليكون و با استفاده از مطالعات نوتروني به بررسي بلور ها پرداختند.*

براي تهيه بلور از يك ماده چند كار بايستي انجام گيرد 1-خالص سازي آن ماده وتهيه بلور كوچك از آن ماده

 2-رشد بلور آن ماده

براي خالص سازي يك ماده از روش هاي متعددي  استفاده مي شود .

جذب سطحي –سانتريفيوژ -كروماتوگرافي-بلور سازي-تبخير-تقطير-خشك كردن-الكتروفورز-تبلور مجدد-رسوب سازي-يخ زدن جز به جز-تقطير جز به جز-صاف كردن-تصعيد- و...در انواع گوناگون روند هاي جداسازي مخلوطي از ماده اصلي و ناخالصي وجود داردكه در مقاديري از حلال حل شده اند.**

 

روش بسيار شايع براي بلور سازي  استفاده از تبخير(Vapor Diffusion ) مي باشد.اين روش خود به دو صورت قطره آويزان(hanging drop method  )  و قطره نشسته(sitting drop method ) قابل اجرا مي باشد.در هر دو  روش نياز به يك قطره حاوي آن ماده خالص(پروتئين يا DNA) وبافر و رسوب دهنده ميباشد اين مواد بايستي  با يك ظرف بزرگ حاوي بافر هاي مشابه و رسوب دهنده مشابه در غلظت هاي بسيار بالاتر به حالت تعادل برسند.در ابتدا قطره حاوي آن ماده داراي غلظت مناسبي براي بلور سازي نمي باشد  اما همانطور كه آب از قطره  بخار مي شود و وارد ظرف مي شود غلظت ماده راسب اقزايش مي يابد تا به يك سطح مناسب براي بلور سازي برسد. از آنجائي كه سيستم در حال تعادل است اين حالات مناسب حفظ مي شود تا زماني كه بلور سازي كامل گردد.تفاوت دو روش قطره آويزان و قطره نشسته در جهت گيري قرار دادن قطره حاوي آن ماده در سيستم مي باشد.هر دو روش نيازمند يك سيستم بسته اي هستند  سيستمي كه بايستي كاملا از هواي بيرون ايزوله گردد اين كار به وسيله ظرف غير قابل نفوذ و يا گريس باقدرت خلاء بالا بين سطوح قابل اجرا مي باشد.***

روش قطره آويزان(hanging drop method )

ظرف محلول (آبي)معمولا حاوي بافر و ماده رسوب دهنده مي باشد.محلول پروتئين (قرمز)حاوي تركيبات مشابهي مي باشد اما در غلظت هاي پائين تر.محلول آن ماده ممكن است همچنين حاوي فلزات نادر و يون هاي باشند كه براي رسوب دادن مواد خاصي لازم باشند .به عنوان مثال مشخص شده كه براي  رسوب انسولين و بلور سازي وجود فلز  روي ضروري مي باشد.

روش قطره نشسته(sitting drop method )

در اين روش قطره حاوي آن ماده(پروتئين) بر روي يك ستون و در بالاي ظرف محلول قرار دارد(بر خلاف روش قطره آويزان).

http://scripts.iucr.org/cgi-bin/paper?S174430910601236X*

http://en.wikipedia.org/wiki/Separation_process**

http://en.wikipedia.org/wiki/List_of_purification_methods_in_chemistry

***http://www.bio.davidson.edu/COURSES/Molbio/MolStudents/spring2003/Kogoy/protein.html

 

 

نوشته شده توسط مهدی باغینی پور در 6 بعد از ظهر |  لینک ثابت   •